Лиофильно высушенный.
Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA - это специализированный синтетический хромогенный субстрат для селективного определения активности фактора Ха (FXa).
Фактор Ха распознает специфическую последовательность аминокислот (Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA) и гидролизует амидную связь между L-аргинином и пара-нитроанилином, высвобождая пара-нитроанилин (pNA), который детектируется спектрофотометрически при 405 нм.
Основные направления применения Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA:
- Кинетические исследования с высокой чувствительностью. За счет структуры Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA обладает очень низким значением константы Михаэлиса по отношению к фактору Ха. Используют для работы с ультранизкими концентрациями фермента: высокая чувствительность субстрата позволяет фиксировать активность фактора Xa даже в сильно разведенных образцах плазмы или клеточных лизатов. Также используют для прецизионного расчета: благодаря сильному сродству фермента к субстрату, определение констант ингибирования для прямых ингибиторов фактора Ха (ривароксабан, апиксабан, эдоксабан и другие) и новых молекул проходит с минимальной погрешностью.
- Скрининг и калибровка низкомолекулярных гепаринов. Этот субстрат является золотым стандартом для контроля анти-Ха активности:
- оценка активности гепарина и фондапаринукса,
- стандартизация тест-систем: создание референсных лабораторных наборов
для калибровки международных стандартов НМГ.
- Исследование прокоагулянтной активности опухолевых клеток. В онкогематологии субстрат применяется для изучения связи между раком и тромбозами: опухолевые клетки часто экспрессируют тканевой фактор или раковый прокоагулянт, активирующие фактор X. С помощью данного субстрата измеряют скорость генерации FXa непосредственно на поверхности живых раковых клеток в культуре.
- Анализ гемосовместимости наноматериалов и медицинских полимеров. При контакте плазмы с чужеродной поверхностью запускается внутренний путь свертывания, а использование Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA позволяет точечно оценить, активируют ли новые наночастицы или покрытия медицинских катетеров каскад коагуляции на уровне фактора Ха, что помогает отсеивать тромбогенные материалы.
Сравнение Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA с Ac-D-Leu-Gly-Arg-pNA:
Использование D-аргинина (D-Arg) вместо D-инвариантного лейцина и бензилоксикарбонильной группы (Z-) вместо ацетильной придает ему уникальные кинетические свойства.
- Сродство: субстрат со структурой Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA обычно имеет более высокое сродство к фактору Ха, чем ацетилированный субстрат с лейцином. Это делает его более чувствительным.
- Растворимость: наличие гидрофобной Z-группы (бензилоксикарбонильной) иногда требует деликатного растворения, в то время как Ac-модификации часто более гидрофильны.
- Профили селективности: хотя оба субстрата специфичны к фактору Xa, Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA может иметь чуть более выраженную (хоть и незначительную) перекрестную чувствительность к трипсину, что учитывают при планировании экспериментов с клеточными культурами, где трипсин используется для снятия клеток с подложки.
