Протеин С

Протеин С является витамин К-зависимой сериновой протеазой и ключевым компонентом комплекса естественных антикоагулянтов Протеин С – Протеин S – тромбомодулин-тромбин — ингибитор протеина С. В этом комплексе тромбин выступает в роли активатора протеина С.

Протеин С преобразуется тромбином в его активную форму (активированный протеин C, АПС), который со своим кофактором протеином S, инактивирует фактор Va и фактор VIIIa. Активация протеина С в присутствии тромбина происходит относительно медленно, но скорость активации значительно возрастает, когда тромбин связывается с трансмембранным белком тромбомодулином. Тромбин, связанный с тромбомодулином не только не имеет прокоагулянтной активности, но и обретает значительную антикоагулянтную активность через взаимодействие с комплексом протеин С-протеин S.

Помимо антикоагулянтной функции, АПС обладает противовоспалительными свойствами. AПC также связывается с PAI-1 (ингибитором активатора плазминогена типа I) и ингибирует его активность, тем самым повышая активность фибринолиза.

АПС подавляется ингибитором протеина С, известного как PAI-3, относящегося к серпиновому семейству ингибиторов сериновых протеаз.

Протеин С синтезируется в печени в виде белка, содержащего легкую цепь с молекулярным весом 21 кД и тяжелую цепь с молекулярным весом 41 кД, соединенных дисульфидной связью. Молекулярная масса белка составляет 62 кД. Аминокислотная последовательность и структура АПС высокогомологична тромбину и другим витамин К-зависимым коагуляционным факторам — ф.VII, ф.IX, ф.X. Минимальная его концентрация в плазме крови здоровых людей составляет примерно 3 мг/мл, что эквивалентно 60 нмоль/л.

Дефицит протеина С наследуется по аутосомно-доминантному типу и значительно увеличивает риск венозной тромбоэмболии, особенно при гомозиготной форме наследования.

Гомозиготная форма дефицита протеина C встречается редко и представлена фульминантной (молниеносной) пурпурой новорожденных (форма ДВС-синдрома, характеризующаяся обширным кожным кровоизлияние и некрозом кожи), который является фатальными, если вовремя не применяется заместительная терапия протеином C.

Гетерозиготная форма дефицита протеина С наблюдается у 0,2-0,4% популяции, среди них около 5% может также обнаруживаться мутация ф.V Leiden в гетерозиготной форме. Дефицит протеина С проявляется ранними тромбозами: инфарктом миокарда, тромбоэмболией легочной артерии, тромбозами глубоких и поверхностных вен нижних конечностей, рецидивирующими тромбозами различной локализации и др. Кроме того, лечение тромбозов непрямыми антикоагулянтами (варфарином и др.) на фоне гетерозиготного дефицита протеина С может приводить к нарастанию клиники тромбозов или сопровождаться развитием острых некрозов кожных покровов различной локализации, так называемых “кумариновых некрозов”.

Приобретенный дефицит протеина С наблюдается при печеночной недостаточности, острых ДВС-синдромах, септических состояниях и утяжеляет течение основного заболевания, что, в свою очередь, требует медикаментозной и трансфузионной коррекции.

Резистентность к активированному протеину С приводит к его неспособности расщеплять факторы Va и / или VIIIa. Это состояние может быть наследственным или приобретенным, и может не быть связано с нарушением самого белка C. Наиболее распространенной причиной резистентности к АПС является мутация фактора V Лейден (Leiden).

Принципы методов определения протеина С

Иммуноферментный анализ (ИФА) — либо с моноклональными, либо с поликлональными антителами к протеину C.

Метод ELISA с очень высокой степенью чувствительности обнаруживает протеин C, но не способен выявлять его функциональные дефекты.

Клоттинговый метод основан на измерении АЧТВ или ПВ.

Обедненная тромбоцитами плазма инкубируется при 37°С с фосфолипидами, контактным активатором (например, каолином) и активатором протеина С. После инкубации (обычно 1-4 минуты) добавляют кальций для инициации свертывания. Фиксируется время, необходимое для формирования сгустка.

Время свертывания крови АЧТВ (или ПВ) зависит от количества ф.Va или ф.VIIIa, присутствующего в реакционной смеси, и это, в свою очередь, будет зависеть от активности активированного протеина C.

Результаты определения активности системы протеина С принято выражать в виде Нормализованного Отношения (НО):

НО калибр – Нормализованное Отношение плазмы-калибратора.

У здоровых лиц НО составляет 1,0 ± 0,3 (М ± 2s). Значение НО ниже 0,7 свидетельствует о значительных нарушении в системе протеина С (функциональная неполноценность, сниженный синтез протеина С, протеина S) или о наличии мутантного фактора V (Leiden), резистентного к действию протеина С. Образцы плазмы пациентов с повышенным содержанием гепарина должны быть исключены из исследования. Прием антикоагулянтов непрямого действия и наличие у пациентов волчаночного антикоагулянта могут приводить к ложнонормальным результатам активности системы протеина С.

(см.инструкцию к Протеин С — тесту)

3. Хромогенный метод определения активности протеина С в образце плазмы основан на способности активированного протеина С гидролизовать пептидный хромогенный субстрат. Количество высвобождаемого при этом пара-нитроанилина (рNА) прямо пропорционально активности протеина С в образце плазмы. Протеин С плазмы активируется при добавлении к ней очищенного экстракта яда Agkistrodon contortrix contortrix.

Процесс идет по следующей схеме:

Протеин С + активатор (избыток) ⇒ АПС

АПС+ Пептид-рNА ⇒ Пептид + рNА (желтый)

Активность протеина С определяют по калибровочному графику, построенному с помощью плазмы-калибратора. (см.инструкцию к Реахром-Протеин С- тесту)

Завышенные результаты могут быть получены при анализе образцов плазм пациентов с повышенным содержанием липидов, гемоглобина, билирубина.

Хромогенный анализ с высокой степенью чувствительности обнаруживает низкий уровень протеина C и регистрирует большинство функциональных дефектов.

Референсные значения

В нормальной плазме здоровых лиц активность протеина С составляет 70 — 130%.

Интерпретация результатов

Причины снижения активности протеина С:

— наличие мутации ф.V (Лейден),

— повышенный уровень ф.VIII в плазме,

— ДВС-синдром, стадия потребления,

— серповидноклеточная анемия,

— заболевания печени,

— воспаление, сепсис, онкологические заболевания,

— прием антагонистов витамина К,

— гиперлипидемия, гипербилирубинемия и др.

Что надо знать о протеине С:

Определения протеина С, как правило, проводится в рамках тестирования тромбофилии. Другие тесты включают в себя определение активности антитромбина, протеина S, генетическое тестирование на мутацию Leiden, мутацию гена протромбина G20210A, определение уровня гомоцистеина.
Протеин С имеет период полураспада приблизительно 6 часов.
Ген протеина C отображается на длинном плече хромосомы 2 в 2q13-14 и кодирует белок из 419 аминокислот.
Активность протеина C повышается у здоровых лиц с возрастом.
Уровень протеина С резко падает при менингококковом сепсисе.

При подготовке раздела использованы данные научного сайта www.practical—hemostasis.com.